SURE Chemically Competent Cell

基因型：

E.coli B e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5(Kanr) uvrC [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)].

簡要說明：

真核生物DNA存在較多“十字型"、“Z字型"等二級或三級結構，這種DNA結構在利用傳統(tǒng)大腸桿菌進行克隆時易被大腸桿菌體內的重組酶系統(tǒng)或其他防御系統(tǒng)識別并對其進行重組，刪除等破壞，導致很難對這類DNA進行正確的克隆操作。SURE菌株可以解決這些問題：此菌株體內重組酶系統(tǒng)整條通路被破壞，并且(McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-) 這些限制性突變的存在賦予此菌株無法對外源DNA進行標記、限制的能力，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同時具有核酸酶(endA)突變、重組酶 (recB recJ)突變，增強了外源DNA的穩(wěn)定性。存在于F′因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以進行藍白斑篩選；Kanr，Tetr賦予菌株KA那霉素和四環(huán)素抗性。High5TM系列SURE感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率達5×108cfu/μg。

操作說明：

1.SURE感受態(tài)細胞放置冰中融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手輕輕打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞最好在冰上融化。

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3.操作過程中勿將感受態(tài)暴露于氧化性環(huán)境中，例如超凈臺應將臭氧排凈后再使用。

4.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

5. 此菌株具有KA 那霉素，四環(huán)素抗性，擁有這兩種抗性的質粒無法使用；對<40 µg/mlLU霉素有抗性，但對100µg/mlLU霉素敏感。使用其他抗生素參考濃度：氨芐QIN霉素（終濃度： 100 µg/ml），LU霉素（終濃度：100 µg/ml）。

6.High5TM系列SURE感受態(tài)細胞采用常規(guī)轉化方法，轉化效率可達5×108cfu/μg。 ；如果有更高要求，可嘗試Stratagene公司推薦的標準protocol。